流感的检测原理是什么?
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现在病原微生物的检测方法丰富多彩。我们常规检测的病原,可以针对病原本身去检测,如使用显微镜,直接检测病原(如细菌、真菌等),但是在临床工作中应用局限,不适用病毒检测。还有一类是培养法,常规的细菌、真菌都可以采用培养技术,但是对于病毒而言,由于培养对实验室条件要求较高,而且也无法满足快速诊断的的要求,所以目前培养法在病毒诊断方面的应用较少,多用于科研实验室。
还有其他方法,比如抗原检测(针对病原微生物)和抗体(针对人体对病原微生物的免疫反应)检测。此外,最重要的,也是今天着重强调的分子生物学检测方法。对于现在的感染性疾病而言,如果医院想让病原微生物诊断水平提高,尽可能满足临床需求,分子生物学检测将会成为一个必不可少的手段。
检测样本采集有哪些注意事项?
流感病毒和一些非典型病原体(比如肺炎衣原体或者鹦鹉热衣原体等),以及病毒不能独立存活繁殖,多存在于粘膜上皮细胞内。因此我们要注意,流感病毒感染,采样的时候就不能轻描淡写的在相应部位轻轻的沾一下,建议稍微用力采集到呼吸道上皮细胞。脱落的上皮细胞可见于所有呼吸道分泌物。强调使用分子生物学方法检测,最主要的一点就是分子生物学检测的灵敏度高,即使原始样本中病原量少也可以检测出来。另外,应注意,有些病原在健康人群是很少存在定植的情况,一般认为健康人群少见甲流、乙流病毒定植,所以在就诊人群中一旦检测出来,同时患者有相关症状的话,即可确诊。其他的呼吸道病毒,比如鼻病毒或呼吸道合胞病毒,在健康人群是有少量定植的,特别是儿童,这时要根据半定量结果,再结合患者本身的症状和免疫状况综合判断。
临床症状的严重程度和病毒量有关,这也解释了为什么说最好不要仅报告一个阴性或阳性的结果,建议分子生物学检测时,报告一个半定量的结果或者在未来随着技术的推进,能够报告一个定量的结果(如采用数字PCR技术),报告样本里含有病毒的量。对于微生物实验室或分子生物学实验室的工作人员来说,由于采集呼吸道样本的时候难于准确定量,可报告给临床一个CT值,即在荧光定量PCR中,扩增曲线开始增高的循环数,CT值越小,说明原始样本的病毒量越高。病毒量与病情相关,最初2-3天达到高峰。当然,有些分子生物学方法,如恒温扩增、扩增产物电泳法检测,是无法提供定量或半定量结果的。
流感病毒实验室检测,样本类型可包括鼻腔分泌物、鼻腔冲洗液、鼻咽拭子、咽拭子、咽冲洗液。
一般而言,咽部采集样本病毒量略低。分子生物学比较灵敏,因此应用的样本种类比较广泛。而抗原检测的灵敏度不高,所以有时如果不是在病毒量高峰时采样或者不是采集的鼻咽部拭子,而只是咽拭子,尤其是医生、护士或者其他相关医疗人员没有严格按照操作在咽部转动3~5周,略微用力的话,都可能导致阳性率下降,患者可能是感染患者,但是没有检测出来。
下呼吸道样本,包括痰液、气管吸出物、Balf,都可以检出病毒。如果怀疑肺炎,从口咽部到下呼吸道采样也可以反映出来。一旦检出,强烈指向患者存在相关部位感染。
因为甲流、乙流以及呼吸道合胞病毒与腺病毒、巨细胞病毒、EB病毒不同,为RNA病毒,容易被环境中RNA酶降解,建议保存于特定样本保存液中送检,其中含有抑制RNA酶的成分,能够减少RNA降解,提高检出的阳性率。
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