原代细胞培养过程是怎么样的
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原代细胞是指从机体取出后立即培养的细胞。一般情况下,常把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养。原代细胞培养需经过准备、处理、剪切、消化分离、计数、培养这几个阶段。具体说明如下:
1、准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,进行操作前的洗手、消毒。
2、处理:点燃酒精灯,把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2-3次,去除血污。
3、剪切:用手术刀将组织切成若干小块,加入比组织块总量多30-50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞。
4、消化分离:将三角烧瓶置于用恒温水浴,每隔20分钟摇动一次,在消化过程中发现消化液混浊时,可在镜下观察,如果组织已分散成细胞团或单个细胞,立即终止消化,进行低速分离后加入适量含有血清的培养液。
5、计数:用计数板计数,对大多数细胞来说,pH需要控制在7.2-7.4范围内。
6、培养:置于37℃的CO2温箱培养,瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞,纱布棉塞易生霉菌,每次换液时需要换新塞。
注意,原代细胞的培养得保证无菌环境,并且细胞生长所需要的营养成分得充足。
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